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干货!一株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其致病性分析

http://www.zhujiage.com.cn 西北农林科技大学动物医学院 2019-08-23 16:10 右右 网友评论 |

  引言

  猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)给世界业造成了巨大的经济损失。PRRSV基因组变异速度快,种类多,不同毒株间基因组同源性较低。此外,NADC30-like毒株的高度变异及其易于与其他毒株发生重组的特性加剧了PRRS防控的难度[1]。目前关于重组毒株重组机制及致病特点的研究并不充分,也使得现有疫苗对PRRSV流行毒株难以产生充沛的交叉保护[2]。监控PRRSV新流行毒株的出现、分离典型PRRSV毒株、分析流行毒株特别是NADC30毒株及新兴重组毒株的基因组特性和致病性对于新型PRRSV疫苗的开发具有重要作用。

  材料与方法

  自山东省某个发病养采集病料,处理后接种于MARC-145细胞和PAM细胞进行病毒分离,经CPE及IFA验证病毒分离成功。通过嗜斑纯化试验对分离毒株SD-YL1712进行纯化后在MARC-145细胞上测定其生长曲线。提取病毒基因组,测定SD-YL1712的全基因组序列,并通过SeqMan、MegAlign、MEGA、TextPad、Clustalx、Mafft及Simplot等软件对其基因组特性进行分析。选取20头4周龄的进行动物攻毒实验,以探究分离株SD-YL1712的致病性,用HP-PRRSV JXA1和LP-PRRSV Ch1a作为对照。

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  结果与讨论

  SD-YL1712是由尚未报道的NADC30-like毒株与JXA1-like形成的重组毒株,重组区位于NSP2。其基因组全长为15014nt(不含Poly A尾),与LV、NADC30、VR2332、CH1a和JXA1等PRRSV毒株的同源性分别为60.1%、86.4%、88.6%、92.7%和95.7%。SD-YL1712的NSP2区有131个氨基酸的不连续缺失,与NADC30-like毒株的缺失模式保持一致。此外,其在aa587位点也存在一个氨基酸的缺失,这也是PRRSV毒株在该位点缺失的首次报道。动物实验表明SD-YL1712能引起与HP-PRRSV JXA1相似的临床症状和病理变化,属于高致病性分离株。本研究为探究PRRSV毒株持续进化的机制及重组毒株的基因组特性和致病性提供了一定理论基础和数据支持,这对PRRSV的防控具有重要意义。

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